СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, ЕДИНИЦ, СИМВОЛОВ И
ТЕРМИНОВ…………………………………………………………........... 4
ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………... 5
ГЛАВА 1. ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРИРОДНЫХ
КЛАССОВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ…........... 12
1.1. Антимикробные белки и пептиды растений и их классификация... 12
1.1.1. Тионины…………………………………………………………….. 13
1.1.2. Дефензины………………………………………………………….. 15
1.1.3. Циклотиды………………………………………………………….. 20
1.1.4. Липид-переносящие пептиды……………………………………... 22
1.1.5. 2S альбумины………………………………………………………. 24
1.2. Механизм действия антимикробных пептидов…………………….. 25
1.3. Хитин и хитозан…………………………………………………….... 28
1.3.1. Химическое строение, молекулярная структура………………… 28
1.3.2. Основные источники хитина и хитозана…………………………. 32
1.3.3. Области применения хитина и хитозана…………………………. 33
ГЛАВА 2. ВЫДЕЛЕНИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ
ХАРАКТЕРИСТИКА БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ ИЗ СЕМЯН И
ВЕГЕТАТИВНЫХ ОРГАНОВ ПРОСВИРНИКОВ MALVA
SYLVESTRIS………………………………………………………………... 38
2.1. Поиск антимикробных пептидов в семенах Malva Sylvestris……… 38
2.1.1. Экстракция и разделение катионных пептидов из семян и
зеленой части Malva Sylvestris…………………………...………………. 39
2.1.1.1. Идентификация белков и пептидов из семян Malva Sylvestris.... 42
2.1.1.2. Идентификация белков и пептидов из зеленной части Malva
Sylvestris……………………………………………………………………. 50
2.2. Биологическая активность тотальных экстрактов и пептиднобелковых фракции Malva Sylvestris ……………………..………………. 52
2.2.1. Антифунгальная активность тотальных экстрактов…….……….. 52
2.2.2. Антифунгальная и инсектицидная активности пептиднобелковых фракций ………………………………………………………... 54
2.2.3. Антимикробная активность пептидно-белковых фракций…….... 56
ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕНИЕ ХИТОЗАНА ЦИСТ ARTEMIA И ЕГО
БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ…..................................................... 59
3.1. Получение хитина и хитозана из цист Artemia…………………….. 59
3.2. Физико-химические свойства хитозана из цист Artemia…………... 60
3.3. Биологическая активность хитозана из цист Artemia..…………….. 66
3.3.1.Сорбционная способность хитозана……………..…….................... 66
3.3.2. Острая токсичность хитозана……..………..…………………….... 68
3.3.3. Гипогликемическая активность хитозана на модели
алиментарной гипергликемии.…………………………..……………….. 70
3.3.4. Влияние хитозана на гемическую гипоксию…...……….………... 72
3.3.5. Гиполипидемическая активность хитозана………………………. 74
3
3.3.5.1. Мониторинг показателей структурно-функционального
повреждения сосудов при экспериментальной гиперлипидемии……... 76
3.4. Изучение возможности применения хитозана в виде гелей в
медицине и косметологии………………………………………………... 78
3.4.1. Гель для косметологии…………………………………………….. 78
3.4.2. Исследование реологических характеристик гелей……………... 81
3.4.3. Местно-раздражающее и аллергезирующее действие геля……... 86
3.4.4. Гель для лечения герпесных инфекций………………………….. 87
ГЛАВА 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ПРИРОДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ БЕЛКОВОЙ И ПОЛИСАХАРИДНОЙ
ПРИРОДЫ, БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И
ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИИ…………………………………………... 92
4.1.1. Реактивы и оборудование………………………………………….. 92
4.1.2. Статистическая обработка полученных результатов……………. 93
4.2. Методы исследования………………………………………………... 93
4.2.1. Выделение и очистка белков и пептидов…………………………. 93
4.2.2. Обессоливание белково-пептидных фракций..…………………... 94
4.2.3. Ионообменная хроматография белкого-пептидного экстракта…. 94
4.2.4. MALDI масс-спектрометрия………………………………………. 95
4.2.5. Восстановление и алкилирование пептидов.................................... 95
4.2.6. Электрофорез в ПААГ……………………………………………... 96
4.2.7. Изоэлектрофокусирование................................................................ 96
4.2.8. Трипсинолиз и экстракция белков в геле электрофореза………... 97
4.2.9. Масс-спектрометрия (Идентификация белков)............................... 98
4.2.10. Получение хитина………………………………………………… 99
4.2.11. Деацетилирование хитина………………………………………... 99
4.2.12. ИК- и ЯМР- спектроскопические анализы ……………………... 100
4.2.13. Определение степени деацетилирования и вязкости хитозана 100
4.2.14. Определение сорбционной способности пищевых волокон….... 101
4.3. Методы изучения биологических свойств………………………….. 102
4.3.1. Изучение фунгицидной активности..……………………………... 102
4.3.2. Определение биологической активности методом
искусственной инокуляции в растительную ткань……………………... 102
4.3.3. Изучение антибактериальной активности………………………... 103
4.3.4. Изучение инсектицидной активности исследуемых фракций...… 104
4.3.5. Исследование острой токсичности………………………………... 104
4.3.6. Исследование антигипоксической активности…………...……… 104
4.3.7. Определение гиполипидемической активности хитозана………. 105
4.3.8. Исследования реологических характеристок гелевых
композиций………………………………………………………………… 107
ВЫВОДЫ…………………………………………………………………. 108
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ……………….…. 109
