ВВЕДЕНИЕ………………………....................................................... 6
ГЛАВА I. ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ
СОЕДИНЕНИЙ CUSCUTAEUROPEAE НА МОДЕЛЯХ
КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР……………………………………………… 13
§1.1. Модели клеточных культур………………………………………. 13
§1.2. Тест-системы на основе перевиваемых клеточных культур….. 17
§1.3. Биологически активные компоненты паразитирующих
растений…………………………………………………………………. 20
§1.3.1. Лектины омелы белой........................................................ 21
§1.3.2. Биологические активные компоненты паразитирующего
растения рода Cuscuta L………………………………… 23
ГЛАВА II. МЕТОДЫ ВЫВЕДЕНИЯ ПЕРЕВИВАЕМОЙ
КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК, ВЫДЕЛЕНИЕ И
ХАРАКТЕРИСТИКА, ВКЛЮЧАЯ БИОЛОГИЧЕСКУЮ
АКТИВНОСТЬ ЛЕКТИНОПОДОБНЫХ БЕЛКОВ
CUSCUTAEUROPEAE………………………………………………… 31
§2.1. Материалы исследований……………………………………….. 31
§2.2. Методы исследований……………………………………………. 31
§2.2.1. Получение и культивирование новой клеточной
линии рака тонкого кишечника Акат…………………………. 32
§2.2.1.1. Получение нового штамма………………………….. 32
§2.2.1.2. Морфологическое исследование клеток…………….. 33
§2.2.1.3. Консервация клеток……………………………………. 33
§2.2.1.4. Разморозка клеток…………………………………….. 34
§2.2.1.5. Культивирование монослойных культур раковых
клеток……………………………………………………………… 34
§2.2.1.6. Определение количества живых клеток……………… 353
§2.2.2. Определение цитотоксической и пролиферативной
активностей соединений на культурах клеток………………………... 36
§2.2.2.1. Определение цитотоксической активности веществ по
МТТ-тесту…………………………………………………….. 36
§2.2.2.2. Измерение высвобождения лактатдегидрогеназы…. 37
§2.2.3. Выделение и характеристика лектинподобных белков из семян
повилики………………………………………………………….. 37
§2.2.3.1. Выделение лектинподобных белков из семян
повилики…………………………………………………………. 37
§2.2.3.2. Электрофоретический анализ белков………………. 38
§2.2.3.3. Определение содержания общих сахаров 39
§2.2.3.4. Определение гемагглютинирующей активности
и углеводной специфичности………………………………….. 39
§2.2.4. Определение регуляторного уменьшения объема клеток…… 40
§2.2.4.1.Выделение тимоцитов крыс……………………………………… 40
§2.2.4.2. Регистрация объема клеток по светопропусканию……….. 40
2.2.5.Определение продукта перекисного окисления и
активности антиоксидантного фермента…………………………….. 41
§2.2.5.1. Определение МДА……………………………………. 41
§2.2.5.2. Определение активности супероксиддисмутазы…… 42
§2.2.6. Статистическая обработка результатов………………………. 42
ГЛАВА III. ЛЕКТИНОПОДОБНЫЕ БЕЛКИ CUSCUTA
EUROPEAE И ДЕЙСТВИЕ ИХ НА МЕТАБОЛИЗМ КЛЕТКИ… 43
§3.1. Выведение новой клеточной линии аденокарциномы тонкой
кишки мыши……………………………………………………………. 43
§3.1.1. Характеристика новой перевиваемой клеточной линии Акат
клон Е7…………………………………………………………………........ 45
§3.2.Определение чувствительности клеток Акат 47
§3.3. Определение цитотоксичности экстрактов растений 51
§3.4.Выделение и характеристика лектиноподобных белков Cuscuta4
еuropаea……………………………………………………………………… 54
§3.5. Определение биологической активности лектиноподобных
белков Cuscutaeuropea…………………………………………………… 62
§3.6. Изучение сочетанного действия лектиноподобных белков
Cuscutaeuropeaс противоопухолевыми препаратами известного
механизма
действия……………………………………………………………………..
71
§3.7. Влияние лектиноподобных белков Cuscutaeuropea на целостность
плазмалеммы раковых клеток……………………………………………. 74
§3.8.Влияние гликопротеидов повилики на регуляцию объема
тимоцитов при гипоосмотическом стрессе……………………………… 77
§3.9. Антиоксидантная активность лектиноподобных белков повилики.. 81
§3.10. Динамика гибели клеток под действием лектиноподобных
белков ………………………………………………………………. 84
§3.11. Зависимость жизнеспособности клеток от концентрации
и временного параметра…………………………………………………. 86
ВЫВОДЫ………………………………………………………………….. 89
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ…………………… 90
