ВВЕДЕНИЕ...................................................................................................... 4
I. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РОДА
Fusarium …………………………………………………………………....... 13
1.1 Описание рода Fusarium его распространение, патогенность и ущерб
для сельского хозяйства…………………………………………………….. 13
1.2 Изучение и современное понимание механизмов патогености…….... 19
1.3 Молекулярная идентификация видов и рас грибных
фитопатогенов……………………………………………………………….. 26
1.4 Гены устойчивости. Устойчивость растений к патогенам…………… 43
1.5 Распространение грибных фитопатогенов в Узбекистане……………. 49
II. МАТЕРИАЛ, УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА Fusarium........................................................... 54
2.1 Использованные материалы…………………………………………….. 54
2.1.1 Реактивы.................................................................................................. 54
2.1.2 Оборудование.......................................................................................... 54
2.2 Растительные патогены............................................................................. 55
2.3 Микологические методы........................................................................... 59
2.3.1. Метод проращивания растений в рулонах.......................................... 59
2.3.2 Метод проращивания семян в чашках Петри...................................... 59
2.3.3 Фитопатологическая (микологическая) экспертиза………………… 59
2.3.4 Среды…………………………………………………………………... 60
2.3.5 Анализ патогенности………..………………………………………… 61
2.3.6 Работы по инфицированию хлопчатника, полевые и тепличные
эксперименты………………………………………………………………… 62
2.4 Молекулярно-генетические методы………………………………......... 65
2.4.1 Выделение геномной ДНК……………………………………………. 65
2.4.2 Гель-электрофорез…………………………………………………….. 69
2.4.3 Элюирование фрагментов…………………………………………….. 69
2.4.4 Полимеразная цепная реакция (ПЦР)……………………...……….. 70
2.4.5 Постановка SNP реакции……………………………………………… 73
2.4.6 Очистка ПЦР продуктов от праймеров в 96 луночном планшете..... 74
2.4.7 Очистка продуктов секвенирования от BigDye терминатора в 96
луночном планшете………………………………………………………….. 76
2.4.8 Секвенирование...................................................................................... 77
2.4.9 Очистка ПЦР продуктов при помощи SAP и EXOI............................ 78
2.4.10 Дизайн праймеров................................................................................. 78
2.5 Молекулярные и статистические анализы и обработка полученных
данных.............................................................................................................. 79
III. ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ И СТЕПЕНЬ
ГЕНЕТИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ….………………………………… 82
3.1 Генотипирование и ДНК секвенирование геномов грибных
патогенов для видовой и расовой идентификации....................................... 82
3.2 Геномные и расовые специфичности генотипов патогенов
3
распространенных в Узбекистане………………………………………….. 110
IV. РАЗРАБОТКА СОВРЕМЕННЫХ ГЕНОМНЫХ ПОДХОДОВ И
ГЕН-СПЕЦИФИЧЕСКИХ SNP-МАРКЕРОВ ДЛЯ БЫСТРОЙ
ИДЕНТИФИКАЦИИ И МОНИТОРИНГА ВИЛТОВЫХ ПАТОГЕНОВ... 117
4.1 Молекулярные инструменты для диагностики и мониторинга
вилтовых болезней…………………………………………………………. 126
V. ПАТОГЕННОСТЬ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ И РАС
ПАТОГЕНОВ……………………………………………………………….. 131
5.1 Патогенные генотипы и их опасность для хлопководства
Республики………………………………………………………………….. 146
VI. СОЗДАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОПУЛЯЦИЙ И ГЕНЕТИЧЕСКОЕ
КАРТИРОВАНИЕ ЛОКУСОВ УСТОЙЧИВОСТИ……………………….. 150
6.1 Основы и возможности создания вилтоустойчивых сортов для
Узбекистана………………………………………………………………….. 158
VII. БИОИНФОРМАТИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ КАНДИДАТ-НЫХ ГЕНОВ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ВИЛТОУСТОЙЧИВОСТИ СОРТОВ
ХЛОПЧАТНИКА……………………………………………………………. 165
7.1 Генетические основы устойчивости хлопчатника к наиболее
опасным патогенам…………………………………………………………. 172
ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………….. 183
РЕКОМЕНДАЦИИ ………………………………………………………... 184
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ…………………………... 185
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ………………………………………………….. 221
ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………………………………………...... 223
