ВВЕДЕНИЕ 7
ГЛАВА I
МЕТОДЫ АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ
ВЕЩЕСТВ, ВЫДЕЛЯЕМЫХ ИЗ ПРИРОДНЫХ ИСТОЧНИКОВ 18
§1.1. Хроматографические методы анализа 18
§1.1.1. Газовая хроматография 21
§1.1.2. Жидкостная хроматография 22
§1.1.3. Высокоэффективная жидкостная хроматография 23
§1.2. Роль хроматографических методов исследований в метаболомике
и в анализе биологически активных веществ в целом 30
§1.3. Актуальность разработки быстрого метода обнаружения
лекарственных веществ на основе женьшеня 34
§1.4. Изучение биологически активных веществ из бактериальных
источников 35
ГЛАВА II
ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ
ВЕЩЕСТВ ИЗ ПРИРОДНЫХ ИСТОЧНИКОВ 35
§2.1. Выделение и изучение биологически активных веществ из
бактериальных источников 35
§2.2. Пигменты бактерий как источники биологически активных
веществ 36
§2.3. Биологически активные метаболиты женьшеня 40
§2.4. Фармакология и фармакокинетика 43
§2.5. Физиологические и фармакологические действия 43
§2.6. Актуальность разработки быстрого метода обнаружения
лекарственных веществ на основе женьшеня 45
ГЛАВА III
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 484
§3.1. Реагенты и экспериментальные приборы 48
§3.2. ВЭЖХ анализ 51
§3.3. Оптимизация хроматографических условий 52
§3.4. Приготовление стандартных растворов и калибровочных кривых 53
§3.5. Пределы обнаружения и количественного определения
гинсенозидов 53
§3.6. Восстановление и точность 54
§3.7. Твердофазная экстракция (ТФЭ) 54
§3.8. Множественный линейный регрессионный метод, использованный
при анализе гинсенозидов 55
§3.9. Валидация разработанных методов быстрого анализа
гинсенозидов 56
§3.10. Достоверность разработанного метода 57
§3.11. Выделение бактерий из морской среды 57
§3.12. Культивирование, выделение и очистка красного пигмента из
бактерии 57
§3.13. Выделение 16S рибосомальной РНК и определение
бактериальной гомологии 58
§3.14. ПЦР условия для амплификации 16S рибосомальной ДНК
штамма 1020R 59
§3.15. Выделение индивидуальных соединений красного пигмента 60
§3.16. Структурные исследования метаболитов красного
пигмента, выделенного из морской бактерии Pseudoalteromonas 61
§3.17. Исследование пигмента на цитотоксичность 62
§3.18. Влияние пигментов на активности
протеинкиназных и протеинфосфатазных ферментов 62
§3.18.1. Эксперименты по фосфолированию субстратов 62
§3.18.2. PTP1B анализ 63
§3.18.3. PP2A анализ 64
§3.19. Анализ активности каспаз 655
§3.20. Анализ ДНК фрагментации 65
ГЛАВА IV
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 67
§4.1. Определение бактериальной гомологии 67
§4.2. Выделение индивидуальных соединений бактериального
красного пигмента 70
§4.3. Структурный анализ индивидуальных соединений красного
пигмента 72
§4.4. Исследование пигмента на цитотоксичность 82
§4.5. Ингибирование активности протеинфосфатазы 85
§4.6. Влияние продигининов и виоласеина на фрагментацию ДНК 87
§4.7. Анализ активности каспаз 90
§4.8. Обсуждение полученных результатов 93
§4.9. РАЗРАБОТКА МЕТОДА БЫСТРОГО
ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИНСЕНОЗИДОВ 97
§4.9.1. Влияние подвижной фазы на хроматографическое
поведение гинсенозидов 97
§4.9.1.1. Зависимость от концентрации ацетонитрила 97
§4.9.2. Влияние типа органического модификатора на
хроматографическое поведение гинсенозидов 98
§4.9.3. Влияние температуры на хроматографическое поведение
гинсенозидов 103
§4.9.4. Исследования энтальпийно-энтропийной компенсации
при хроматографическом поведение гинсенозидов 107
§4.10. Атрибуты растворенного вещества, способствующие
удержанию гинсенозидов в ПВС связанной стационарной фазе 110
§4.11. Множественный линейный регрессионный анализ 112
§4.12. Исследования на ОДС (С18) колонке 116
§4.13. Влияние температуры на эффективность разделения 116
§4.14. Влияние температуры на порядок элюции гинсенозидов на6
ОДС (С18) связанной колонке 119
§4.15. График Вант Хоффа 121
§4.16. Оптимизация хроматографических условий разделения
гинсенозидов 125
§4.17. Количественное определение стандартов гинсенозида на
ОДС модифицированной колонке 128
§4.18. Количественное определение стандартов гинсенозида на
ПВС модифицированной колонке 130
§4.19. Практические применения 132
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 141
ВЫВОДЫ 145
ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА 147
Приложения 163
