КИРИШ 5
I БОБ. РЕКОМБИНАНТ АНТИГЕН ХУСУСИЯТЛИ
ОҚСИЛЛАР, УЛАР ОЛИНАДИГАН ЭКСПРЕССИЯ
ТИЗИМЛАРИ ВА ТОЗАЛАШ УСУЛЛАРИ
12
1.1. Рекомбинант антиген хусусиятли оқсиллар 12
1.2. Рекомбинант оқсиллар олинадиган экспрессия тизимлари 16
1.3. Ҳашарот личинкаларида олинадиган рекомбинант оқсиллар 20
1.4. Рекомбинант оқсилларни тозалаш усуллари 26
II БОБ. BOMBYX MORI ЛИЧИНКАЛАРИДАН РЕКОМБИНАНТ
PRES2-S ОҚСИЛИНИ АЖРАТИШ ВА ТОЗАЛАШ
43
2.1. Bombyx mori (тут ипак қурти) личинкаларини инфицирлаш учун
рeкомбинант rBmNV -polh-PreS2-S вирусини тайёрлаш
43
2.2. Bombyx mori личинкаларининг PreS2-S гени кодлайдиган
оқсилни энг кўп миқдорда синтезловчи зотларини ҳамда
рекомбинант оқсил экспрессиясининг энг мақбул вақтини аниқлаш
45
2.3. Рeкомбинант PreS2-S оқсилини тозалаш 48
2.3.1. Bombyx mori личинкаларини гомогeнизациялаш 48
2.3.2. Рeкомбинант PreS2-S сақловчи оқсил фракцияларининг энг
оптимал чўктириш шароитларини танлаш
52
2.3.3. Рекомбинант PreS2-S оқсилини тутувчи фракцияни
тузсизлантириш
57
2.3.4. Рекомбинант PreS2-S оқсилини Sephadex G-200 SF ёрдамидаги
КХ усули ёрдамида тозалаш
58
2.3.5. rHBsAg (PreS2-S) оқсилини тутувчи фракциянинг NATIVE
PAGE электрофорез таҳлили
63
2.3.6. Одам гепатит В вируси рекомбинант юза антигенини (PreS2-S)
ион-алмашиниш (DEAE Sepharose FF) хроматографияси усули
ёрдамида тозалаш
652.3.7. Колонкали хроматография (HiLoad 26/600 Superdex 75 pg)
усули ёрдамида рекомбинант PreS2-S оқсилини тоза ҳолда ажратиб
олиш
68
2.3.8. Superdex 75 pg сорбенти ёрдамидаги якуний рехроматография
жараёни
69
2.4. Тозалаб олинган рекомбинант оқсилни тавсифи (ИФА, ПААГ
электрофорез, Иммуноблот) 71
III БОБ. РЕКОМБИНАНТ ОҚСИЛЛАРНИ АЖРАТИШ,
ТОЗАЛАШ ВА ТАВСИФЛАШ УСУЛЛАРИ
75
3.1. Тадқиқот материаллари 75
3.1.1. Материаллар 75
3.1.2. Жиҳозлар 75
3.2. Тадқиқот усуллари 76
3.2.1. RT-PCR таҳлили 76
3.2.2. Тут ипак қурти (Bombyx mori) личинкаларини rBmNPV-PreS2-S
рекомбинант бакуловируси билан инфицирлаш
77
3.2.3. Синтезланган рекомбинант оқсил миқдорини аниқлаш
усуллари. ИФА таҳлили протоколи
78
3.2.4. Рекомбинант оқсилни ажратиш ва тозалаш усуллари 80
3.2.5. Эритмадаги оқсиллар коцентрациясини аниқлаш 85
3.2.6. Тозалаб олинган рекомбинант оқсилни тавсифлаш усуллари.
ПААГ ва Иммуноблот
86
3.2.7. Натижаларнинг статистик таҳлили 91
ХУЛОСА 93
ФОЙДАЛАНИЛГАН АДАБИЁТЛАР РЎЙХАТИ 94
